نظام تحليل مختبري آلي بالكامل من شركة dynamic BIOSENSORS heliX cyto

تحديد

• اسم المنتج: هيليكس سيتو
• الشركة المصنعة: أجهزة الاستشعار الحيوية الديناميكية GmbH
• إصدار: 1.0

معلومات المنتج

• تم تصميم نظام heliX cyto لقياس تفاعل الخلية الفردية (scIC) لقياس حركية ربط الجزيئات المصبوغة بالفلورسنت بالأهداف الموجودة على أسطح الخلايا بطريقة محددة زمنياً.

تعليمات استخدام المنتج

استخدام شريحة heliXcyto

• تحتوي شريحة heliXcyto على قناة ميكروفلويدية واحدة مزودة بنقاط أقطاب كهربائية لالتقاط الخلايا وقياسها. تأكد من وضع الشريحة بشكل صحيح واتبع تعليمات التقاط الخلايا.

شريحة الصيانة

• استخدم شريحة الصيانة لعمليات التنظيف والاختبار والصيانة فقط. تجنب استخدامها في التجارب لتجنب التلوث.

تشغيل المخزن المؤقت

• استخدم المخزن المؤقت المتحرك 1 (RB 1) أثناء القياسات. راجع ورقة توافق scIC في الدليل الرئيسي لمزيد من المعلومات.

تحليل مخطط الاستشعار

• راقب مخطط الاستشعار آنيًا باستخدام برنامج heliOS أثناء القياسات. حلل استجابة الفلورسنت مع مرور الوقت لاستخراج معدلات الحركة.

التخميل

• خذ بعين الاعتبار استخدام التخميل كخطوة اختيارية لمنع امتصاص المحلل عن طريق احتضان كاشف التخميل على الشريحة.

تطبيع

• التطبيع عملية لتوحيد معايير البيانات لأغراض المقارنة والتحليل. اتبع إجراءات التطبيع الموضحة في دليل المستخدم.

مقدمة

• هذا الدليل مخصص كدليل مختصرview حول نظام heliXcyto وقدراته. جميع الفصول مُفصّلة في دليل heliXcyto الرئيسي الموجود على https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

مصطلحات heliXcyto، قياس التفاعل الخلوي أحادي الخلية

• قياس التفاعل الخلوي أحادي الخلية (scIC) هي تقنية تقيس حركية ربط جزيء مُسمى فلوريًا (محلل) بهدف (ربيط) على سطح الخلية عن طريق تسجيل إشارة فلورية بطريقة محددة زمنياً.

المحلل

• المحلل هو جزيء مُسمى فلوريًا في مرحلة متحركة يمكنه الارتباط بهدف على سطح الخلية.

ربيطة

• "الربيطة" هو الاسم المستخدم في برنامج heliOS لوصف هدف على سطح الخلية يرتبط به المُحلِّل. قد يكون هذا الهدف جزيئًا مُستقبِلًا، أو دهنًا، أو سكرًا، أو أي جزيء آخر على سطح الخلية.

مصيدة الخلايا

• مصائد الخلايا عبارة عن أقفاص بوليمرية متوافقة حيويًا ونفاذة للتدفق، مثبتة على شريحة heliXcyto. وهي مصممة لالتقاط خلايا بأحجام مختلفة تتراوح بين 6 و25 ميكرومتر تقريبًا وتثبيتها في قناة التدفق. تتوفر مصائد الخلايا بثلاثة أحجام مختلفة: صغير، متوسط، وكبير.

رقاقة هيليكسايتو

• تحتوي رقائق heliXcyto على قناة ميكروفلويدية واحدة بفتحات على كل جانب. تقع نقطتا قطب ذهبيتان في منتصف القناة.
• نقطة مرجعية، والنقطة الثانية تحمل أقفاص بوليمرية ثلاثية الأبعاد متوافقة حيويًا لالتقاط الخلايا، وتُستخدم كنقطة قياس. يمكن أن تحتوي نقطة القياس على مصائد واحدة أو خمسة مصائد من نفس النوع.
• تتيح نقطة المرجع إمكانية الرجوع الفوري إلى الإشارة الفلورية المُجمّعة. شريحة heliXcyto قابلة لإعادة الاستخدام والتخلص منها.

شريحة الصيانة

• شريحة الصيانة عبارة عن شريحة ميكروفلويدية ذات قناة واحدة تستخدم في جميع عمليات التنظيف والاختبار والصيانة.
• تشمل هذه العمليات روتين التنظيف والنوم، وروتين الاستيقاظ والتحضير، وغسل النظام، واختبار السوائل. لا يُنصح باستخدام هذه الشريحة في التجارب الفعلية مع محاليل الخلايا/البروتينات لمنع تلوثها.

تشغيل المخزن المؤقت

• المخزن المؤقت المُستخدم في heliXcyto أثناء القياس. يُنصح عادةً باستخدام المخزن المؤقت المُستخدم 1 (RB 1).
• يرجى الرجوع إلى ورقة توافق scIC الموجودة في الدليل الرئيسي لمزيد من المعلومات.

مخطط الاستشعار

• مخطط استشعار scIC هو رسم بياني لاستجابة الفلورسنت بالعد في الثانية (cps) مع مرور الوقت، موضحًا تطور التفاعل على الخلايا أو داخلها. يمكن رسم هذا المنحنى viewتم تسجيل البيانات في الوقت الحقيقي في heliOS أثناء القياس.
• عند تحليل مخططات الاستشعار، يتم تحديد أفضل أسّي مناسب للآثار الفلورية الملاحظة واستخراج المعدلات الحركية (كون، كوف).

التخميل

• التخميل خطوة اختيارية أثناء التشغيل، حيث يُحقن كاشف التخميل في الشريحة ويُحضّن لحجب الأسطح. هذا يُساعد على منع امتصاص المُحللات لمواد الشريحة.

تطبيع

• تُستخدم خطوة التطبيع لمراعاة الاختلافات الطفيفة في الإشارات الناتجة عن جمع الإشارات من كل نقطة قياس بواسطة كاشف منفصل. تُحقن صبغة فلورية بتركيز محدد (بناءً على أعلى تركيز للمحلل ودرجة وسمه) في بداية التحليل. تُدرج خطوة التطبيع هذه تلقائيًا في طريقة القياس، وتُستخدم ذروة التطبيع المقاسة لتصحيح الاختلافات بين الكواشف تلقائيًا أثناء تحليل البيانات، قبل الرجوع إليها آنيًا.

مبادئ القياس scIC

تطبيقات scIC

• تقيس تقنية قياس التفاعل الخلوي أحادي الخلية (scIC) المعدلات الحركية وتقارب المحلل المسمى بالفلورسنت الذي يرتبط ويتحرر من هدفه مباشرة على الخلايا الحية.
• إن اكتشاف المحللات في scIC مستقل عن الحجم وبالتالي فهو مناسب لأي جزيء من أقل من نانومتر إلى > 100 نانومتر ومرتبط بجميع فئات الجزيئات من الجزيئات الصغيرة والببتيدات والأبتامرات والأجسام النانوية والأجسام المضادة والأجسام المضادة ثنائية التخصص والبروتينات والمجمعات البروتينية وحتى الحويصلات (الإكسوسومات) والجسيمات النانوية الدهنية والفيروسات.

يمكن لتكنولوجيا scIC معالجة مجالات التطبيق التالية:

• قياس الإشارة ampخطوط العرض في شاشات الربط
• التحليل الحركي لمعدلات كون وكوف
• تقييم التقارب والشغف من خلال نماذج كوف والملاءمة ثنائية الطور
• اختبارات الخصوصية
• التقدير النسبي للبروتينات الغشائية على سطح الخلية
• دراسات تصنيف النمط الظاهري والمنافسة
• اختبارات التثبيط
• تقييم استيعاب البروتينات المستهدفة

إمكانيات أجهزة heliXcyto

النظام السائل

• يُغذّى النظام السائلي لـ heliXcyto بما يصل إلى ثلاث زجاجات عازلة مختلفة، مما يتيح تنوعًا في تشغيل وصيانة العازل. يمكن ضبط مضخات heliXcyto على معدلات تدفق تتراوح بين 20 و500 ميكرولتر/دقيقة، لتلبية احتياجات مختلفة.ampمتطلبات التحليل والاختبار. تتصل قناة تدفق الشريحة بالنظام السائلي من خلال فتحتين. تتصل الفتحة اليسرى بالفتحة السفلية.ampخطوط التنظيف والتنظيف والغسيل، في حين أن الفتحة الموجودة على الجانب الأيمن متصلة بخط التجديد.
• يتيح نظام السوائل ثنائي الاتجاه هذا التقاط الخلايا بشكل مستقر أثناء تشغيل خطوات مختلفة من القياس وإعادة إنشاء الشريحة في النهاية لإعادة استخدام الشريحة أثناء الاختبار.
• الشكل 1. تكامل الشريحة في النظام السائل

النظام البصري

• يتم إثارة إشارة الفلورسنت بواسطة الثنائيات الباعثة للضوء الأحمر والأخضر (LEDs) ويتم اكتشافها بواسطة أربعة عدادات فوتونية فردية، والتي تجمع الإشارات الحمراء والخضراء من كل بقعة على طول العمق الكامل للقناة.
• من الممكن مراقبة إشارتين مستقلتين في وقت واحد على نفس نقطة القياس، مما يسمح بقياس تفاعلين في وقت واحد في إعداد اختبار ثنائي اللون.
• الشكل 2. إعداد البصريات
• يتم جمع الإشارات من كل نقطة قياس بواسطة كاشف منفصل، مما قد يؤدي إلى اختلافات طفيفة في النتائج الأولية. ولمعالجة ذلك، تُدرج خطوة تطبيع تلقائيًا في اختبارات توليد البيانات.
• بالإضافة إلى عدادات الفوتون الواحد، زُوّد الجهاز بكاميرا CCD ومجهر ضوء منعكس. تتيح هذه الأدوات تصوير الخلايا في الوقت الفعلي، مما يُمكّن من تقييم سلامة الخلايا وجودة المُحلل طوال عملية القياس.
• يضمن هذا الإعداد المشترك تتبع التفاعلات والظروف البيولوجية، مما يوفر تقييمًا شاملاً للتجربة.

سير عمل scIC

يمكن تقسيم عملية قياس scIC إلى ثلاث خطوات رئيسية

1. التصميم التجريبي في heliOS: يبدأ كل قياس بتصميم التجربة في برنامج heliOS. يُهيأ سير عمل التحليل باختيار طرق مُحددة مسبقًا وضبط مُعاملات التجربة، مثل سلالة الخلايا المُستخدمة، وتركيز المُحلل، وظروف المُحلول العازل. يحسب heliOS تلقائيًا الكميات الدقيقة للخلايا والمُحللات والمُحاليل العازلة والمحاليل الأخرى اللازمة للقياس، مما يُبسط عملية التحضير.
2. إعداد المخازن والمحللات والخلايا: بعد الانتهاء من تصميم التجربة، تُجهّز المواد المطلوبة وفقًا للمواصفات التي تقدمها heliOS. تُحمّل المخازن المؤقتة والمحللات والخلايا في وحدات الجهاز.ampلير.
3. القياس وتحليل البيانات: يُجري النظام سلسلة مُجدولة من قياسات التفاعل الآلية في الوقت الفعلي، دون أي تدخل إضافي من المستخدم. ويمكن تحليل البيانات أثناء إجراء القياس للحصول على رؤى فورية حول النتائج.

اختبارات scIC في heliOS

بالإضافة إلى الاختبارات المولدة للبيانات، يوفر البرنامج أيضًا طرقًا لاختبار الشريحة والتنظيف وصيانة الأجهزة.

الجدول 1. الاختبارات المولدة للبيانات التي تم التحقق منها

حركية scIC	يقيس الحركية الكاملة للخلايا مع ارتباط المحلل القابل للتعديل بين 1 إلى 5 تركيزات، متبوعًا بتفكك واحد بعد أعلى تركيز. قناة خضراء أو حمراء. تحتوي على خيار لاختبار المُحلِّل فقط.
scIC Kinetics – ثنائي اللون	يقيس الحركية الكاملة للخلايا مع إمكانية تعديل ارتباط المُحلل بين تركيز واحد وخمسة تركيزات، متبوعًا بتفكك واحد بعد أعلى تركيز. يتم تفعيل القناتين الخضراء والحمراء في آنٍ واحد. يحتوي على خيار لاختبار المُحلل فقط.
تفكك scIC – ثنائي اللون	يقيس تفكك المحلل من الخلايا التي تم حضنها مسبقًا بمحلل مُلوَّن بالفلورسنت مع قناة خضراء و/أو حمراء.

الاستعدادات وتطوير التحليل لقياس scIC

هناك بعض النقاط التي يجب مراعاتها قبل إعداد قياس scIC

• تركيز المحلل، درجة التسمية، الخصائص، والجودة.
• حل التطبيع وقوة الإثارة.
• جودة الخلايا والتعامل معها.

تركيز المُحلل ودرجة التسمية

• وفقًا لممارسات قياس الحركية القياسية، نوصي باختيار نطاق تركيز مولاري للمحلل يتراوح بين 0.1x و10x من ثابت تفكك التوازن المتوقع (Kd) لحركية التركيزات المتعددة. أما بالنسبة لحركية التركيز الواحد أو قياسات التفكك، فيجب أن يتراوح تركيز المحلل بين 1x و10x من ثابت تفكك التوازن المتوقع. يبلغ إجمالي حجم المحلل المطلوب، المحسوب لزمن ارتباط مدته 10 دقائق بمعدل تدفق 25 ميكرولتر/دقيقة، حوالي 300 ميكرولتر.
• يُفضل أن تكون درجة الوسم (DOL) للمحلل 1، مع أن قيم DOL التي تتراوح بين 2 و3 تظل مقبولة. مع ذلك، يُرجى الانتباه إلى أن زيادة عدد الوسمات على المحلل قد تؤثر على خصائص ارتباطه، وقد تزيد من احتمالية التكتل أو الارتباط غير النوعي. لتحقيق درجة وسم مثالية، اتبع البروتوكول المرفق مع مجموعات الوسم التي تحتوي على صبغة حمراء أو خضراء من كواشف heliXcyto.
  تطبيع
• التطبيع هو الخطوة الأولى في جميع طرق توليد البيانات. فهو يُعوّض عن الاختلافات الطفيفة في الإشارة الناتجة عن استخدام كاشفات منفصلة لكل نقطة قياس. في هذه الخطوة، تُحقن صبغة فلورية بتركيز يُحدده المستخدم في بداية التحليل.
• يُحسب تركيز محلول التطبيع بضرب أعلى تركيز للمحلل المُعَلَّم بالفلورسنت المُستخدَم في القياس في درجة تمييز المُحلل (DOL). يُوجِّه هذا التركيز طاقة إثارة الصمام الثنائي الباعث للضوء (LED) المُطبَّقة أثناء القياس. الهدف هو أن تصل ذروة محلول التطبيع إلى نفس إشارة الفلورسنت تقريبًا. ampخط العرض باعتباره أعلى تركيز للمحلل.
• راجع جدول تركيز محلول التطبيع في الدليل الرئيسي لضبط القيم الأولية. يُرجى العلم أن الجدول يُرشد الإعدادات الأولية، ولكن يُمكن تعديل طاقة إثارة LED بشكل أكبر أثناء إعداد التحليل.

جودة الخلايا والتحضير

• يجب أن تكون قابلية الخلايا للبقاء أعلى من 95%، وأن تكون الخلايا في حالة جيدة عمومًا. بالنسبة للخلايا الملتصقة، نوصي باستخدام خلايا ذات نسبة تلاقي بين 50 و70%.
• بالنسبة لخلايا التعليق، نوصي بالحصاد في مرحلة منتصف السجل للنمو. هناك حاجة إلى 50 ميكرولترًا من تعليق الخلايا بمعدل 1E + 06 خلية / مل لكل تشغيل.

حصاد خلايا التعليق

1. افصل حوالي ٢E+٠٦ خلايا بسرعة ٣٠٠ غرام لمدة ٧ دقائق لإزالة وسط زراعة الخلايا. تخلص من السائل العلوي.
2. اغسل الخلايا مرة واحدة بإعادة تعليق حبيبات الخلايا في حوالي ١ مل من محلول DPBS. اطرد المُعلق مركزيًا بسرعة ٤٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق لتجميع الخلايا الحية. تخلص من السائل العلوي بعناية لإزالة الشظايا والوسط.
3. قم بإعادة التعليق بلطف في 1 مل من DPBS، ثم انقل التعليق إلى أعلى مصفاة الخلايا وقم بتصفية التعليق عن طريق تدفق الجاذبية.
4. قم بقياس تركيز الخلايا في المعلق المجهد واضبطه على 1E+06 خلية/مل.
   • نصيحة: تميل بعض خلايا التعليق إلى تكوين مجموعات. أعد تعليق المجموعات برفق، ثم قم بتصفية الخلايا قبل خطوة الطرد المركزي الأولى.
   • استخدم أطراف الماصة ذات الثقب العريض عند التعامل مع معلقات الخلايا لتجنب قوى القص العالية أثناء النقل أو إعادة التعليق.

حصاد الخلايا الملتصقة

1. اغسل الخلايا باستخدام DPBS المعقم.
2. قم بفصل الخلايا عن قارورة الثقافة باستخدام كاشف التفكك المفضل لديك (على سبيل المثال TrypLE).
3. قم بإعادة تعليق الخلايا المنفصلة إلى الحجم المفضل من الوسائط وقم بترشيحها باستخدام مصفاة خلايا مقاس 30 نانومتر.
4. اختياريًا، أضف EDTA في حالة الخلايا الملتصقة بقوة (التركيز النهائي 5 ملي مولار).
5. افصل الخلايا عند 300 غرام لمدة 7 دقائق لإزالة وسط زراعة الخلايا. تخلص من السائل العلوي.
6. أعد تعليق الخلايا في 1 مل من DPBS.
7. قم بقياس تركيز الخلايا وضبطه إلى 1E+06 خلية/مل.
   • نصيحة: يمكن استخدام وسائط الخلايا المخففة بنسبة 1:4 باستخدام DPBS لإضافة العناصر الغذائية إلى الخلاياampفي حالة الخلايا الحساسة أو سير عمل الاختبار الطويل.

تثبيت الخلايا

1. افصل ما يصل إلى ١٠E+٠٦ خلايا باستخدام جهاز الطرد المركزي بسرعة ٣٠٠ غرام لمدة ٧ دقائق لإزالة وسط زراعة الخلايا. تخلص من السائل العلوي.
2. أعد تعليق حبيبات الخلية في 1 مل من محلول PBS، ثم قم بطردها بالطرد المركزي وتخلص من السائل العلوي.
3. أعد تعليق حبيبات الخلية في 500 ميكرولتر من PBS/2% PFA (62.5 ميكرولتر من محلول 16% PFA + 437.5 ميكرولتر من PBS).
4. احضن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق (مع رجها بلطف بشكل متقطع).
5. أضف 500 ميكرولتر من PBS وقم بطرد المعلق بسرعة 400 جم لمدة 5 دقائق لإزالة PFA.
6. تجاهل المادة طافية.
7. أعد تعليق الخلايا في 1 مل من PBS، ثم قم بترشيحها من خلال مصفاة خلايا 30 ميكرومتر، ثم قم بطردها بالطرد المركزي (400 جم، 5 دقائق) وتخلص من السائل العلوي.
8. أعد تعليق الخلايا في حوالي 1 مل من PBS (اختياري: اضبط التركيز النهائي على 5E + 06 خلية / مل).
9. قم بتخزين الخلايا الثابتة عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية، واستخدمها خلال شهر.
   • إذا كان من الضروري إصلاح المزيد من الخلايا، فيرجى زيادة جميع المبالغ وفقًا لذلك.
   • ملحوظة: يمكن تعديل سرعة الطرد المركزي أثناء حصاد الخلايا حسب نوع الخلية، إذا كانت الخلايا حساسة ويتم استخدام قوى جي أقل بشكل شائع.
   • يمكن أن يتراوح تركيز PFA بين 0.5 إلى 4%.

إعداد اختبار scIC

ينبغي تضمين اختبارات scIC التالية في تطوير الاختبار ويمكن تكرارها ضمن سير عمل الاختبار لاحقًا.

يتم تقسيم سير عمل تطوير الاختبار إلى 3 خطوات متتالية مميزة:

1. اختبار الشريحة الخلوية
2. اختبار المحلل فقط
3. اختبار الحركية

اختبار شريحة الخلية

• يجب تقييم جودة الشريحة الجديدة قبل استخدامها في القياس. ابدأ بإجراء اختبار شريحة خلوية بشكل منفصل. راجع فصل شريحة خلوية Helix في الدليل الرئيسي لمعرفة كيفية إعداد اختبار الشريحة وتقييمه.

اختبار المحلل فقط

• يبدأ تطوير اختبار scIC باختبار المحلل فقط، والذي يقيم سلوك المحللات المسمى بالفلورسنت على سطح شريحة جديدة بدون خلايا.
• يمكن أيضًا تكرار هذا الاختبار بشكل دوري لتقييم استقرار المحللات المسمى. يمكن تكوين اختبار scIC Analyte Only في اختبارات Kinetics عن طريق تمكين مربع الاختيار Analyte only ضمن إعدادات الخلية.
• بالنسبة لتقييم جودة المحلل، فإن أعلى تركيز مستخدم يكون كافياً ويمكن تكوينه عن طريق تعطيل جميع الارتباطات في التحليل باستثناء واحد.

إعداد سير عمل تحليل الحركية

• يُستخدم اختبار الحركية عادةً ضمن سير عمل آلي يتضمن اختبارات توليد البيانات وعناصر الصيانة. بعد اجتياز المُحلل لاختبار مراقبة الجودة "المُحلل فقط"، يُمكن استخدامه في القياس على الخلايا.
• لقياس المعدلات الحركية بشكل موثوق، يجب أن تكون استجابة الإشارة أثناء الارتباط معتمدة على التركيز، وتزداد مع تركيزات المحلل الأعلى.
• يجب أن يصل أعلى تركيز إلى مستوى ثابت، مما يدل على تحقيق حالة استقرار الارتباط. يجب أن يستمر التفكك لفترة كافية لفك ارتباط جزء كبير من المُحلل المرتبط (أكثر من 5%) لضمان ملاءمة موثوقة للمنحنى.
• استخدم المعلمات الافتراضية في شروط التحليل كنقطة بداية وقم بتعديلها بشكل أكبر اعتمادًا على نتائجك.

Examp1. سير عمل التحليل الموصى به

يتيح سير عمل التحليل للمستخدمين ترتيب طرق القياس والصيانة بناءً على احتياجاتهم التجريبية المحددة.

قد يتضمن سير عمل التحليل الخطوات التالية بالترتيب المشار إليه:

1. برايم (شريحة الصيانة)
2. حركية scIC (الخلايا أ، المحلل أ، الشريحة الخلوية)
3. غسل النظام (شريحة الصيانة)
4. حركية scIC (الخلايا B، المحلل A، الشريحة الخلوية)
5. غسل النظام (شريحة الصيانة)
6. حركية scIC المُهيأة للمحلل فقط (المحلل أ، شريحة Cyto)
   • يتم تنفيذ خطوتي التحضير وغسل النظام على شريحة الصيانة. يتم تضمين غسل النظام عند التبديل إلى خط خلايا مختلف وقبل إجراء اختبار المُحلل فقط في نهاية سير العمل.
   • لمزيد من التفاصيل، راجع القسم الخاص بغسيل نظام Cyto في الدليل الرئيسي.
   • عند إجراء اختبارات حركية على الخلايا، يجب مراعاة قابلية الخلية للبقاء على قيد الحياة، والتي تعتمد على سلالة الخلية.
   • بالنسبة لسلالات الخلايا الحساسة، يُنصح بإجراء تحليل واحد أو تحليلين فقط لكل سير عمل تحليل. أما بالنسبة لسلالات الخلايا الأكثر مرونة، فيمكن إضافة تحليلات إضافية إلى قائمة الانتظار.
   • ملحوظة: لإجراء اختبارات إضافية، قم بإعداد محلول الخلايا في قوارير منفصلة عن طريق تسمية الخلايا بشكل مختلف.
   • تأكد من أن جميع الكواشف طازجة ومُرشَّحة بفلتر 0.22 ميكرومتر. أخيرًا، ضع الكواشف المُجهَّزة في الجهاز وفقًا لتعليمات heliOS.
   • يمكن بدء التشغيل عن طريق النقر فوق أيقونة السهم الأزرق "تشغيل" واتباع الخطوات الموجودة في معالج بدء الاختبار.
   • بمجرد بدء التشغيل، يعمل الجهاز بشكل مستقل حتى اكتمال سير عمل التحليل بالكامل.

تحليل تجارب scIC

سير عمل تحليل scIC

• قد تختلف بيانات scIC عن بيانات المستشعر الحيوي القياسية بسبب التعقيد الطبيعي للأحداث التي تحدث على الخلايا الملتقطة على سطح شريحة heliXcyto، مما قد يؤدي إلى حدوث مخالفات في مخطط الاستشعار.
• لذلك، يتم التأكيد على مراقبة الجودة للصور الملتقطة في كل خطوة قياس ولصور الاستشعار المولدة في صفحة الهبوط للتحليل الآلي.
• بالإضافة إلى ذلك، يوفر heliOS أدوات لمعالجة مخالفات مخطط الاستشعار أثناء تحليل البيانات اليدوي scIC.

عملية تحليل بيانات scIC:

1. فحص الصورة:
   • قم بفحص جميع الصور الملتقطة أثناء القياس (علامة التبويب "الصور" في نافذة التجربة).
   • كم عدد الخلايا التي بقيت ثابتة في الفخاخ طوال القياس بأكمله؟
   • ما هي حالة الخلايا؟ تحقق من دقة وتكامل الخلايا.
   • هل أصبحت المصائد نظيفة بعد خطوة التجديد؟
2. التحقق من البيانات الخام:
   • فحص البيانات الخام لنقطة المرجع 1 ونقطة القياس 2
   • يجب أن تكون إشارة ذروة التطبيع قريبة من أعلى إشارة للبيانات الخام أو أعلى منها.
   • هل تعود الإشارة إلى مستوى خط الأساس في كلتا النقطتين، أم أن هناك دليلاً على ارتباط غير محدد؟
3. التحقق من البيانات الطبيعية:
   • هل يتم تركيب قفزات الحقن للبقعة 1 والبقعة 2 بشكل صحيح؟
4. التحقق من البيانات المرجعية:
   • هل تعيد خطوة التجديد الإشارة إلى خط الأساس؟ إذا لم يكن كذلك، فتحقق من وجود خلايا أو حطام في المصائد بعد التجديد عن طريق إعادةviewجي الصور.
   • هل هناك طفرات أو قيم شاذة أو أي مخالفات أخرى في المنحنيات المرجعية؟ إذا كان الأمر كذلك، فأعدview الصور لتحديد الأسباب المحتملة والنظر في التعديلات اليدوية.
5. التحقق من ملاءمة البيانات:
   • إجراء تقييم الجودة البصرية
   • هل يصف الملاءمة بدقة سلوك المنحنيات، أم أن خط الملاءمة يعبر مخطط الاستشعار؟
   • هل يتوافق الملاءمة مع انحناء البيانات؟
   • هل هو ampهل يتوافق العرض مع البيانات المرجعية؟

تحليل البيانات الآلي scIC

• تعمل عمليات التحليل الآلية في scIC على تحويل البيانات الخام إلى مخططات مراقبة الجودة والبيانات الملائمة ببضع نقرات فقط.
  1. افتح تجربة scIC بالنقر المزدوج على التجربة المحددة في قائمة التجارب
  2. انقر فوق زر التحليل الكبير باللون الأزرق الموجود أسفل علامة تبويب التجربة.
  3. من سير عمل التجربة، حدد الاختبار الذي ترغب في تحليله.
  4. اختر Kinetics scIC من أنواع التحليل المتاحة، ثم انقر فوق التالي.
     • ملحوظة: إذا كانت التجربة لا تزال جارية، فسيتم عرض التحاليل المكتملة فقط في القائمة. بعد اختيار تحليل، ستعرض النافذة التالية جميع أنواع التحاليل المتاحة الخاصة بالطريقة/التحليل المستخدم.
  5. إذا لزم الأمر، قم بتكوين التحليل في النافذة التالية. نموذج المطابقة الافتراضي هو "الحركية - مستوى النهاية الحرة" مع تفعيل مربع الاختيار "إجبار مستوى النهاية على المطابقة حتى الصفر". لا تُغيّر هذا النموذج إلا إذا تطلبت البيولوجيا أو البيانات وصفًا أكثر تعقيدًا.
  6. بمجرد الانتهاء من التكوين، انقر فوق "تحليل" لرؤية جميع اللقطات المشتقة، ومخططات الاستشعار الخام والمعالجة، وقيم الحركية.
• بسبب التعقيد المتأصل فيampبالنسبة للاختبارات المستخدمة في scIC، فإن مخططات الاستشعار الناتجة قد تحتوي على مخالفات.
• ولمعالجة هذه المشكلة، يتم التركيز على مراقبة جودة الصور ومخططات الاستشعار في التحليل الآلي.
• إذا كانت هناك حاجة إلى تصحيحات يدوية أو تحليل أكثر عمقًا، يتم توفير الأدوات اللازمة لتصحيح القطع الأثرية داخل Scratchpad للتحليل اليدوي.

صيانة وإزالة التلوث من heliXcyto

• صيانة جهاز heliXcyto ضرورية لضمان الأداء الأمثل للجهاز وطول عمره الافتراضي. تشمل الصيانة الدورية إجراءات تنظيف تمنع التلوث وتحافظ على سلامة النظام، مما يتيح الحصول على نتائج دقيقة وتشغيل سلس. كما أن العناية المستمرة ضرورية لموثوقية الجهاز وجودة نتائج التجارب.
  تتضمن صيانة heliXcyto إجراءين رئيسيين: Cyto System Wash، والذي يمكن دمجه مباشرة في سير عمل الاختبار، وClean & Sleep، والذي يتم إجراؤه كإجراء منفصل للحفاظ على الجهاز قبل الاستخدام مباشرة بعد قياس أطول طوال الليل أو عندما لا يكون قيد الاستخدام لأكثر من يومين.
• يتطلب كل من نظام الغسيل والتنظيف والنوم وجود شريحة صيانة heliX® في علبة الشريحة.

روتين النظافة والنوم

• روتين التنظيف والنوم مُصمم لتنظيف الجهاز وإيقافه/تخزينه. تتضمن هذه الطريقة شطف الأنبوب السائل لجهاز heliX® أولًا بالماء فائق النقاء، ثم بإيثانول بنسبة 70%. وأخيرًا، تُهوى جميع الأنابيب بالهواء.
• عملية التنظيف هذه مؤتمتة بالكامل وتستغرق حوالي 40 دقيقة. أثناء العملية، يُفرغ الإيثانول في زجاجة الماء، لذا يجب التخلص من محتويات الزجاجة بعد ذلك.
• بعد التنظيف والسكون، يدخل الجهاز في وضع السكون ولا يمكن استخدامه إلا بعد إجراء عملية التنشيط والتشغيل. يلزم استخدام شريحة صيانة heliX®‎ في كلا التشغيلين.
• مهم: ولمنع تلوث الأنبوب، تأكد من التخلص من محتويات زجاجة المياه (خليط الماء/الإيثانول) وتفريغ حاوية النفايات بعد إجراء التنظيف.

الإغلاق والتخزين طويل الأمد

• في حالة عدم الاستخدام لفترات طويلة، يرجى إزالة الزجاجة التي تحتوي على الماء والإيثانول بعد إجراء التنظيف والنوم من صينية التخزين المؤقت وترك الأنابيب معرضة للهواء.
• قم أيضًا بإزالة شريحة صيانة heliX®، وخزّنها في عبوتها الأصلية. هذا يمنع الارتداد والتلوث. أوقف تشغيل الجهاز.

غسيل نظام الخلايا الخلوية

• يقوم نظام heliXcyto System Wash بتنظيف نظام الميكروفلويديك على نطاق واسع باستخدام محلول التنظيف 3 (CS3) في غضون 45 دقيقة تقريبًا. يتم التقاط CS3 في ثانيتينtages. الإبرة الأولى وampيتم ملء الحلقات وحضنها لإزالة أي ملوثات.
• ملحوظة: قم بإجراء عملية غسل نظام الخلايا الخلوية يوميًا على الأقل عند استخدام الجهاز. نوصي بإضافة طريقة غسل نظام الخلايا الخلوية إلى سير عمل التحليل إما بعد كل تحليل (عند التبديل إلى سلالة خلوية جديدة أو في حالة...)ampجودة الرقاقة دون المستوى الأمثل) أو حتى نهاية سير عمل التحليل. استبدل رقاقة الصيانة بعد 50 غسلة نظام سايتو كحد أقصى، كما هو موضح في عدد عمليات التجديد في صينية الرقاقة. view من التحكم في الجهاز.

اتصال

• أجهزة الاستشعار الحيوية الديناميكية GmbH
• شارع بيرشتنجر. 8/10
• 81379 ميونيخ
• ألمانيا
• شركة بروكر العلمية ذ.م.م
• 40 طريق مانينغ، مانينغ بارك
• بيليريكا ، MA 01821

الولايات المتحدة الأمريكية

• معلومات الطلب order.biosensors@bruker.com
• الدعم الفني support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• يتم تصميم وتصنيع الأدوات والرقائق في ألمانيا.
• ©2025 شركة Dynamic Biosensors GmbH
• للاستخدام البحثي فقط. غير مخصص للاستخدام في الإجراءات التشخيصية السريرية.

التعليمات

الأسئلة الشائعة حول scIC

هل يمكنني إعادة استخدام شريحة heliXcyto؟

نعم، شريحة heliXcyto قابلة لإعادة الاستخدام والتخلص منها. اتبع إرشادات التنظيف والتخزين الصحيحة.

ما هو الغرض من شريحة الصيانة؟

يتم استخدام شريحة الصيانة لعمليات التنظيف والاختبار والصيانة لضمان الأداء السليم للنظام.

كم مرة يجب أن أقوم بتنظيف الجهاز؟

يُحافظ على نظافة النظام السائلي لجهاز heliXcyto باستخدام طريقتي غسل نظام Cyto وClean&Sleep. يُنصح بتنظيف النظام الميكروفلويدي باستخدام Cyto System Wash على شريحة الصيانة بعد كل تحليل (خاصةً عند تغيير نوع الخلية) أو في نهاية سير عمل التحليل على أبعد تقدير. يُطبق إجراء Clean&Sleep قبل الاستخدام مباشرةً بعد إجراء قياس طويل سابق (مثلاً في الصباح بعد تجربة ليلية) أو عند توقف جهاز heliXcyto عن العمل لأكثر من يومين.

ما هي المدة التي يمكن تخزين الحلول: RB 1 / الماء / CS 1 / CS 3 / محلول التطبيع في الجهاز؟

بشكل عام، قبل كل قياس، يجب فحص جميع المحاليل بحثًا عن الحجم المتبقي واحتمالية وجود عكارة أو ترسب. في هذه الحالة، يجب استبدال المحلول فورًا. يجب استبدال الماء وRB 1 يوميًا، وترشيح RB 1 قبل كل قياس. يمكن استخدام محلول التطبيع المخفف لمدة يومين متتاليين. تبقى محاليل التنظيف ثابتة لمدة ثلاثة أيام تقريبًا.

ما هي المدة التي يمكنني فيها استخدام شريحة heliXcyto؟

يمكن التحقق من تاريخ انتهاء صلاحية شريحة heliXcyto من خلال تبويب صينية الشريحة في قسم الأجهزة بنظام heliOS. لا يمكن ضمان سلامة الشريحة بعد تاريخ انتهاء الصلاحية. مع ذلك، طالما بقيت المصائد ثابتة، وكان السطح نظيفًا، وكانت خلفية الفلورسنت أقل من الحد الأقصى المحدد في اختبار الشريحة، تُعتبر الشريحة صالحة للاستخدام في القياسات. يُنصح بالتنظيف الخارجي المنتظم للشريحة (مجموعة تنظيف الشريحة CCK-1-1) بعد استخدامها لإطالة عمرها بشكل ملحوظ.

ما هي المدة التي يمكنني فيها استخدام شريحة الصيانة؟

يجب استبدال شريحة الصيانة بعد 50 غسلة للنظام (يتم احتسابها كعمليات تجديد في علامة تبويب درج الشريحة في عنصر التحكم في الجهاز في heliOS).

كم مرة يجب إجراء اختبار heliXcyto Chip؟

يجمع اختبار الشريحة معلومات حول خلفية الفلورسنت، ونظافتها، وسلامتها قبل بدء تجربة جديدة. يُجرى الاختبار مرة واحدة على الأقل عند استخدام شريحة جديدة، ولكن يُنصح بإجرائه قبل كل تجربة أو في بدايتها للتحقق من حالة الشريحة. يتيح ذلك ضبط ظروف القياس وتتبع أي تشوهات في مخططات الاستشعار إلى الشريحة أو الجهاز.

ما هي كيمياء وسم المحلل؟

يتم ربط صبغة فلورية حمراء أو خضراء، على التوالي، بواسطة مجموعات الوسم لدينا عبر إسترات NHS بالأمينات الأولية في مُحللات البروتين (مثل اللايسينات أو الطرف الأميني). يمكن الاطلاع على التفاصيل وقسم استكشاف الأخطاء وإصلاحها في دليلي مجموعة وسم heliXcyto للصبغة الحمراء (مجموعة الوسم بالصبغة الحمراء 2 CY-LK-R2-1) ومجموعة وسم heliXcyto للصبغة الخضراء (مجموعة الوسم بالصبغة الخضراء CY-LK-G1-1) من موقعنا. webمحل.

أين يمكن العثور على بيانات اعتماد heliOS ومعلومات الترخيص؟

يتم وصف عملية إدخال بيانات الاعتماد ومعلومات الترخيص في قسم تثبيت heliOS في دليل heliXcyto من موقعنا webالموقع (دليل heliXcyto). يجب حفظ معلومات ترخيصك في مجلد scIC على جهاز الكمبيوتر المكتبي heliXcyto، والذي أنشأه أخصائي التطبيقات لدينا أثناء التدريب.

ما هي نطاقات الإثارة / الانبعاث لـ heliXcyto؟

الإثارة باللون الأحمر: ٦٠٥-٦٢٥ نانومتر، والانبعاث (الكشف): ٦٥٥-٦٨٥ نانومتر. الإثارة باللون الأخضر: ٤٩٠-٥١٠ نانومتر، والانبعاث باللون الأخضر: ٥٢٥-٥٧٥ نانومتر.

كم مرة يجب عليّ قياس نفس التجربة للحصول على موثوقية إحصائية؟

لتحقيق معدلات حركية متوسطة موثوقة، يُنصح بإجراء 3-4 تكرارات لقياسات حركية التركيز الثلاثي في ​​مجموعة خلايا متجانسة. في مجموعة بيانات متسقة، يجب أن تكون معدلات الارتباط والتفكك للتكرارات ضمن فترة زمنية تتراوح بين 2-4 مرات.

ما هي حساسية قياسات scIC؟

يعتمد الحد الأدنى للكشف من حيث التعبير عن الهدف على وسم المُحلل، ولكن عادةً ما يستطيع scIC قياس حركية ما لا يقل عن 1000-10000 جزيء لكل خلية. لزيادة الحساسية، يُنصح بالتقاط 5 خلايا على الأقل، وموازنة مستوى الضوء في المُحلل (DOL) بين 5 و10 وقوة مصباح LED لتحقيق أقصى عدد من الفلورسنت.

ما هي حدود اكتشاف heliXcyto من حيث المعدلات الحركية؟

يرجى مراجعة المواصفات الفنية لجهاز heliXcyto للاطلاع على أحدث الحدود الفنية، والتي يمكن الاطلاع عليها في دليل heliXcyto (دليل heliXcyto). ثابت التفكك Kd: من 10 بيكو مولار إلى 1 ملي مولار، ثابت معدل الارتباط kon: من 1E3 إلى 1E7 M-1s-1، ثابت معدل التفكك koff: من 1E-6 إلى 1s-1. لمزيد من المعلومات، يرجى مراجعة دليل heliXcyto الخاص بنا. webموقع.

المستندات / الموارد

نظام تحليل مختبري آلي بالكامل من شركة dynamic BIOSENSORS heliX cyto [بي دي اف] دليل المستخدم نظام تحليل مختبري آلي بالكامل heliX cyto، heliX cyto، نظام تحليل مختبري آلي بالكامل، نظام تحليل مختبري آلي، نظام تحليل مختبري، نظام تحليل، نظام

مراجع

• دليل المستخدم